作者：李振淼; 李文卵泡颗粒细胞增殖细胞周期
摘要：目的探讨微小RNA-383(miR-383)在小鼠卵泡不同发育阶段的表达规律以及对颗粒细胞增殖的影响。方法取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、21、21 d[腹腔注射10 IU孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人绒毛膜促性腺激素(hCG)6 h后]的卵巢组织、卵泡和颗粒细胞,通过实时定量PCR法检测miR-383的表达情况。取小鼠出生21 d的颗粒细胞,分别转染miR-383模拟物(miR-383 mimics)或miR-383抑制物(miR-383 inhibitor),另外设置阴性对照组。通过噻唑蓝(MTT)法检测颗粒细胞增殖情况,流式细胞术检测颗粒细胞的细胞周期变化。采用Western blot法检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin B、细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、CDK2、CDK4的蛋白水平。结果与小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔较小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又进一步降低。与小腔前卵泡颗粒细胞相比,大腔前卵泡和腔较小的有腔卵泡颗粒细胞中miR-383的含量降低,但是在成熟卵泡颗粒细胞中的含量却有所上调。与空白组相比,miR-383 mimics组颗粒细胞的增殖速度减慢,且G0/G1期比例升高,G2/M期比例降低,cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平降低;而miR-383 inhibitor组颗粒细胞的增殖速度加快,G0/G1期比例降低,G2/M期比例升高,且cyclin D1、cyclin B、CDK1、CDK2、CDK4蛋白水平增加。结论miR-383可通过抑制细胞周期相关蛋白的表达,将颗粒细胞周期阻滞在G0/G1期,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖。
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