作者：张兰兰; 曹领改; 魏德强前列腺癌单克隆抗体
摘要：目的建立产生抗人游离前列腺特异抗原单克隆抗体(f-PSA mAb)的细胞株,获得抗体后建立抗人f-PSA化学发光免疫分析法(CLIA)并进行应用。方法采用杂交瘤技术获得2株稳定分泌抗f-PSA mAb的细胞株,将细胞株用转瓶扩大培养并将上清液采用亲和纯化法获得抗体,ELISA测定抗体效价、特异性及表位,表面等离子共振法测抗体亲和力;建立双抗体夹心CLIA,采用标准曲线定量法对该体系进行分析性能评估,同时对426例临床血清样本进行检测[其中130例的总PSA水平在(4-10)ng/mL,为“诊断灰区”],评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性。结果获得抗人f-PSA mAb的杂交瘤细胞株(f-10-1、f-14.1)。用f-10-1和f-14—1建立的CLIA的检测范围为(0.1~30)ng/mL,灵敏度为0.05ng/mL,检测结果的相对偏差均在±5%内,与癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)及结合态PSA(c-PSA)无交叉反应,该试剂与罗氏试剂相关系数达到0.99,灰区样本阳性符合率、阴性符合率、总符合率均高于90%。结论成功制备了抗人f-PSA mAb,建立了特异性定量检测人f-PSA的双抗体夹心CLIA。
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