作者：吕燕妮; 付龙生; 李艳明; 温金华; 魏筱华...小胶质细胞脑血管内皮细胞紧密连接
摘要：目的 研究在氧糖剥夺（OGD）条件下,向脑血管内皮细胞（RBEC）中加入提取自脂多糖（LPS）刺激的大鼠小胶质细胞上清液的循环微囊泡（MV）, 考察其对RBEC紧密连接功能的损伤及作用机制。方法分离提取1 mg/L LPS刺激24 h的小胶质细胞培养上清液中的MV并进行鉴定, 实时荧光定量PCR检测MV中微小RNA-27a（miR-27a）水平。RBEC分为正常对照组、正常对照组-MV组、OGD6h组、OGD-MV孵育组。免疫荧光细胞化学染色检测RBEC中紧密连接蛋白闭合蛋白（occludin）和密封蛋白5（claudin-5）的表达, Western blot法检测RBEC中occludin、claudin-5、Toll样受体4（TLR4）、核因子κBp65（NF-κBp65）和p38的蛋白磷酸化水平, ELISA测定RBEC中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果 MV形状为近似圆形双层膜结构, 平均直径为150 nm, 符合MV的形态学特征。与正常小胶质细胞相比,LPS刺激的小胶质细胞培养上清液的MV中miR-27a水平异常升高。与正常对照组相比, 加入MV不会对正常细胞产生影响, 当在OGD条件下, RBEC中紧密连接受到损害, occludin和claudin-5表达降低, 而加入MV后, RBEC紧密连接破坏加重,occludin和claudin-5表达进一步降低, OGD组小胶质细胞occludin和claudin-5蛋白水平降低。与正常对照组相比,OGD组小胶质细胞TLR4及NF-κBp65、p38磷酸化水平增加, 而OGD-MV孵育组中, TLR4和NF-κBp65、p38的磷酸化水平进一步升高, 且IL-1β和TNF-α水平也明显增加。结论 LPS刺激小胶质细胞上清液MV中miR-27a水平升高, 可致OGD条件下RBEC紧密连接损害进一步加重, 可能与其上调TLR4表达及NF-κBp65、 p38的磷酸化相关。
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