作者：秦思达 任宏 李晓军 杨成成 杨斌 张湘忠 ...smac基因细胞转染真核表达载体a549细胞
摘要：目的：构建人的smac基因真核表达载体pcDNA3．1-Smac，并在肺腺癌A549细胞中表达。方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）技术从人睾丸组织中扩增到smac基因，构建重组真核表达载体pcDNA3．1-Smac。酶切及测序鉴定重组质粒正确后，脂质体介导转染至肺腺癌A549细胞中。采用RT．PCR、Westernblot法检测外源基因smae的表达，M1rr法检测细胞生长抑制率。结果：PCR扩增片段与预期片段大小相符，插入片段测序结果与GenBank公布的一致，表明人smac基因克隆及真核表达载体pcDNA3．1-Smac构建成功。在mRNA水平和蛋白水平，转染后的细胞中外源基因smac表达均明显增加。转染smac质粒72h后，细胞的生长抑制率较转染空质粒组显著增加。结论：成功构建重组真核表达载体pcDNA3．1-Smac，并在肺癌A549细胞中进行了表达；验证了转染后对肺癌细胞生长有抑制作用。
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