作者：王甲甲 郭锋杰 李跃辉 李官成鼻咽癌抗独特型抗体疫苗双价原核表达
摘要：目的：构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体，并对其产物作初步鉴定。方法：利用分子克隆技术依次将G22，150插入到原核表达载体pET25b（＋）中，经菌落PCR，双酶切验证并测序。阳性重组子转化入表达菌株E．coliBL21（DE3），经IPTG诱导表达后，表达的重组蛋白经Histag纯化试剂盒纯化后复性。用Western blot方法鉴定G22-150双价蛋白的表达，ELISA方法分析其蛋白活性，并进一步观察其对外周血单个核细胞的刺激增殖情况。结果：构建的原核表达载体pET25b—G22—150经测序验证，序列正确。双价蛋白G22—150以包涵体形式高效表达，经纯化后纯度达90％以上。Westernblot鉴定表达的蛋白相对分子质量（Ms）约42000，与预期相符。ELISA鉴定复性后的蛋白已恢复活性，并能在体外刺激外周血单个核细胞的增殖。结论：成功获得了有活性的双价抗独特型抗体，为临床对鼻咽癌进行主动免疫治疗提供了理论基础。
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