作者：田宏 刘湘涛 吴锦艳 尚佑军 郑海学 代兴...猪瘟c株e2基因重组逆转录病毒载体pk15细胞基因表达
摘要：目的：建立一种能稳定表达猪瘟E2蛋白的真核细胞系，并对E2蛋白的生物活性进行分析。方法：从实验感染兔脾组织中提取总RNA，应用RT—PCR得到了CSFVC-株结构蛋白基因E2，并在目的片段的5’端引入Kozak序列（Kozak，1987），定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro。经PCR、酶切和序列分析鉴定，获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV—G共转染GP2—293细胞，收获假型病毒，在Polybrene的介导下感染PK15细胞，嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA方法对表达蛋白的生物活性进行分析。结果：初步检测显示所建立的PK15-E2细胞能稳定携带外源基因进行传代，而且表达的E2蛋白能被CSF阳性血清所识别，并具有良好的生物活性。结论：通过该方法建立的真核表达系统是切实可行的，能为猪瘟的预防和诊断奠定良好的基础。
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