作者：石琳 陈振萍 袁向飞 杨少光 张宇光 韩忠...胰岛素原弗林蛋白酶
摘要：目的：构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体。方法：首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原cDNA；然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点，使突变的cDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点，该突变型胰岛素原cDN段命名为INS-M2；最后将INS—M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上，并与骨架载体共转染至细菌内，通过细菌内同源重组得到重组载体。结果：HindⅢ和XhoⅠ酶切、PacⅠ酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功。结论：构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞，对糖尿病进行基因治疗奠定了基础。
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