作者：张艳丽; 高美华人突变cd59真核表达中国仓鼠卵巢细胞抗补体活性
摘要：目的: 构建人突变CD59(hmCD59)基因的真核表达系统, 深入研究hmCD59在糖尿病血管并发症中的作用.方法: 分别构建两种含有hmCD59 全长cDNA序列的重组pALTER质粒, 运用脂质体介导法, 与pcDNA3质粒共转染CHO细胞, 以G418筛选阳性克隆(编号为hmCD59-1-CHO及hmCD59-2-CHO).应用荧光抗体技术、免疫酶联技术及Western blot, 进一步检测hmCD59蛋白在转染细胞膜表面的表达.通过双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯(BCECF/AM)荧光染料释放试验, 对hmCD59蛋白糖基化前后的抗补体活性进行检测.结果: 筛选出的阳性克隆细胞用荧光抗体技术、免疫酶联技术检测表明, 在细胞膜表面有hmCD59分子表达.将细胞的裂解物进行Western blot证实, 在其相对分子质量(Mr)为20 000处可见1条与CD59的Mr相当的蛋白带.BCECF/AM荧光染料释放试验提示, 两种突变质粒的表达产物均具有抗补体活性, 糖基化后活性减弱.结论: 获得两株可稳定表达hmCD59的细胞.表达的hmCD59具有抗补体活性, 但糖基化后活性减弱.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
