作者：张思河; 杨向民; 邢金良; 陈志南免疫方案booster抗体滴度ig亚类
摘要：目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果.方法: 以原核表达的GST-HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3/HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、 DNA肌肉免疫及pcDNA3/HAb18G-HCC booster(DNA-cell booster)免疫接种BALB/c小鼠.采用间接ELISA和细胞ELISA, 同时测定免疫血清中抗变性和天然HAb18GEF IgG抗体的滴度和Ig亚类.用Western blot检测各免疫方案制备的抗血清, 与变性HAb18GEF抗原结合的特异性.用免疫荧光法验证DNA-cell booster免疫接种法制备的抗血清, 与细胞膜上天然HAb18G抗原的结合特异性.结果: 以GST-HAb18GEF常规免疫后, 可诱导高滴度的IgG1抗体产生, 但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表位; 以pcDNA3/HAb18G肌肉免疫后, 可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生, 但滴度较低; 以DNA-cell booster免疫后, 可诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生.结论: 不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的多克隆抗血清, 为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础.
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