作者：袁慧君; 扈荣良; 包世俊; 张守峰犬克隆测序免疫学特性
摘要：目的: 获得犬白介素-18(cIL-18)基因并探讨其作为基因疫苗佐剂的免疫效果.方法: 从犬的外周血中分离白细胞, 经ConA刺激培养5～12 h.提取犬白细胞总RNA作为模板, 通过RT-PCR技术扩增cIL-18 cDNA.将其克隆到载体pMD18-T中测序, 并与已发表的序列进行比较.将cIL-18 cDNA克隆入pIRES1neo中, 构建cIL-18真核表达载体.以200 μg∶200 μg的比例, 与狂犬病病毒糖蛋白表达载体pIGneo混合免疫犬, 并与糖蛋白单独免疫犬的免疫应答进行比较.结果: 扩增获得单一长约0.6 kb核酸带, 测序证明长度为582 bp, 编码193个氨基酸, 与从犬肺巨噬细胞中扩增的cIL-18基因的序列完全一致.以构建的表达载体pIIL18与pIGneo混合免疫与用pIGneo单独免疫相比较, 前者抗狂犬病病毒特异性抗体的水平显著低于后者; 但混合免疫组犬外周血淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激的反应性显著高于糖蛋白单独免疫组.结论: cIL-18全长为582 bp, 其真核表达载体具有增强细胞免疫应答的能力, 同时可显著抑制体液免疫应答.本研究为cIL-18作为基因疫苗佐剂的研究奠定了基础.
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