作者：王平; 王润田; 王丽; 王从印; 佟慧; 李全...包涵体蛋白单克隆抗体elisa
摘要：目的:制备鼠抗人白细胞介素15(hIL-15)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法:自重组人白细胞介素15(rhIL-15)基因工程菌中,提取融合蛋白GST-IL-15,以120/LSDS-PAGE分离鉴定,切取含有目的条带的凝胶,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及克隆化.对杂交瘤细胞株的稳定性及其分泌的mAb的特性进行鉴定.另外,以rhIL-15包涵体蛋白(rhIL-15IBP)免疫新西兰白兔,制备抗hIL-15的多克隆抗体(多抗).用抗hIL-15的mAb与多抗建立双抗体夹心间接ELISA.结果:获得1株可稳定分泌特异性抗hIL-15 mAb的杂交瘤细胞.建立了双抗体夹心间接ELISA,检测rhIL-15蛋白的敏感性达10μg/L.结论:成功地制备抗hIL-15 mAb,并建立了一种可用于hIL-15检测的双抗体夹心间接ELISA.
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