作者：张剑侠 翟焕 牛茹萱 李瑞民中国野生葡萄山葡萄vaerd15原核表达多克隆抗体
摘要：为探索中国野生山葡萄（Vitis amurensis）抗寒相关基因的抗寒作用机理,以中国野生山葡萄抗寒基因cDNA文库筛选的VaERD15基因（V.amurensis early responsive to dehydration 15）cDNA为模板,采用PCR扩增获得VaERD15基因的开放阅读框为423bp;通过构建pGEX-6p-1/VaERD15原核表达载体并转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21,经IPTG诱导表达出32.2kD的融合蛋白GST-VaERD15。该融合蛋白主要以包涵体表达形式存在,经0.1 mmol·L^-1IPTG于37℃下诱导4h,其表达量最大;进一步用电透析法纯化融合蛋白,以纯化产物免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测结果表明其抗原-抗体免疫反应良好,获得的多克隆抗体能够用于VaERD15基因的功能分析。
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