作者：张亮亮; 蔡立娅; 魏启美; 江陆斌; 梁韶晖恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶重组蛋白表达无细胞麦胚表达系统活性鉴定
摘要：目的：构建杆状病毒昆虫表达质粒p Fast-N-set7cd、p Fast-C-set7cd和无细胞麦胚表达载体p EUHis-set7cd,表达恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶SET7催化结构域（Pf SET7cd）,并鉴定Pf SET7cd的组蛋白甲基转移酶活性。方法：通过分子克隆技术构建获得p Fast-N/C-set7cd以及p EU-His-set7cd表达质粒,尝试通过杆状病毒传代方式与无细胞麦胚表达方式获得重组Pf SET7cd蛋白,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并进一步检测重组蛋白的酶活性。结果：用于昆虫表达的重组质粒p Fast-N-set7cd、p Fast-C-set7cd双酶切结果大小与测序结果均正确,但是Western blot并未检测到其在昆虫细胞中的可溶性表达产物;p EU-His-set7cd通过无细胞麦胚表达系统表达获得的蛋白与预测大小一致,经Western blot鉴定正确,并用NTA-Ni2＋亲和层析纯化。体外酶活实验显示Pf SET7cd具有催化H3第36位赖氨酸上三甲基化（H3K36me3）活性。结论：通过无细胞表达系统获得可溶性的Pf SET7cd重组蛋白,Pf SET7cd重组蛋白具有介导H3K36me3的活性,但不影响H3K4me3和H3K9me3水平。
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