作者：徐菲菲; 刘秀华; 蔡莉蓉缺氧预处理抑制作用心肌细胞细胞凋亡操作程序
摘要：目的:研究缺氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)对于心肌细胞蛋白激酶C(PKC)和核转录因子κB (NF-κB)表达的影响,及其在缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法:在培养的SD乳鼠心肌细胞制作缺氧/复氧(H/R)模型,以荧光素染料Hoechst33258测定心肌细胞凋亡率;制备心肌细胞蛋白提取物,以新PKCε亚型(nPKCε)特异性抗体测定nPKCε相对蛋白含量;以抗NF-κB抗体检测NF-κB的表达;并以PKC抑制剂H7与心肌细胞预孵育后,观察H7对于HPC诱导的PKC和NF-κB表达上调以及心肌细胞保护作用的影响.结果:缺氧复氧造成心肌细胞凋亡, HPC可以降低心肌细胞H/R后凋亡率,并诱导nPKCε和NF-κB表达上调;PKC抑制剂H7可以消除HPC诱导的PKC、NF-κB表达上调和心肌细胞保护作用.结论:HPC可以提高乳鼠心肌细胞对于H/R的耐受性,其机制涉及PKC介导的NF-κB表达上调.
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