作者：郑海红 孙志 朱兴全 袁世山猪繁殖与呼吸道综合征病毒载体表达转录调控序列
摘要：目的本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒（PcV2）的主要免疫原开放阅读框架2（ORF2）表达载体的可行性，以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖。方法以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作，分别在pAPRRS的ORFI和ORF2间，ORF5和ORF6间，ORF6和ORF7间插入PCV2ORF2，且对拯救病毒vPCV进行了病毒学及分子生物学鉴定。结果vPCV的~gmRNa2．1利用了PRRSVmRNA2的转录调控序列（TRS），形成由PRRSVGP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgmRA2．1：外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS而产生3条新亚基因组，其中sgnuqNA2．2和sgmRNA2．3采用PCV2上的序列来取代PRRSVRNA2本身的TRS；另一条sgmRNA2．4则为非经典型亚基因组，其TRS在PRRSV相应的AUG下游。结论2株PRRSV—PCV2重组病毒可以稳定传代，为进一步研发PRRSV遗传标疫苗奠定了基础；插入片段上一些类似TRS序列的引入及插入片段（718bp）过长导致PRRSVORF2TRS本身和其两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因；PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子，这为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
