作者：石小玲; 阚婷婷; 李闯; 宗迅成; 邬敏辰菜豆环氧化物水解酶对映选择性区域选择性不对称水解
摘要：【背景】光学纯环氧化物及邻二醇是一类多功能手性砌块。与化学合成法相比,环氧化物水解酶（EHs）介导的生物转化法因环境友好而成为当前的研究热点。【目的】从菜豆（Phaseolus vulgaris）中克隆一种EH基因并进行原核表达,研究重组酶催化环氧苯乙烷（Styrene oxide,SO）的水解特性。【方法】通过计算机辅助分析EHs的一级结构,推测一种菜豆来源的未知功能蛋白（PvEH4）可能具有EH活性。利用RT-PCR技术,以菜豆总RNA为模板,扩增编码PvEH4的基因pveh4,并实现其在Escherichia coli BL21（DE3）中的表达。利用重组菌E.coli/pveh4全细胞催化SO水解,分析PvEH4的对映选择性和区域选择性。【结果】一级结构分析表明,PvEH4具有α/β折叠型EH特有的保守区域。SDS-PAGE结果显示PvEH4的表观分子量为39.4 kD。PvEH4针对SO的对映选择率（E值）为10.1,区域选择性系数αS和βR分别为99.5%和82.5%。当外消旋SO转化率达到68.1%时,可同时获得99.9%ees的（R）-SO和92.3%eep的（R）-苯乙二醇（Phenyl-1,2-ethanediol,PED）,两者的产率分别为31.9%和65.6%。【结论】PvEH4的挖掘不仅增加了植物类EHs的数量,同时也为EHs的蛋白分子改造提供参考。
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