作者：董方玉; 崔博沛; 李克雷; 崔力沙; 刘佩; ...肠道病毒d组68型假病毒鉴定方法急性弛缓性脊髓炎
摘要：目的制备携带萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒D组68型(enterovirus D68,EV-D68)假病毒。方法分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的EV-D68表达子和携带萤光虫荧光素酶报告基因的EV-D68复制子,共转染HEK-293T细胞后收获EV-D68假病毒;实时逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定EV-D68假病毒;实时荧光定量PCR检测假病毒滴度,荧光强度定量检测假病毒感染活性。结果成功构建EV-D68表达子和复制子;成功制备EV-D68假病毒,RT-PCR和Western blotting结果表明其具有萤火虫荧光素酶报告基因和与活病毒相同的衣壳蛋白,拷贝数为(4~8)×10^6 copies/mL,荧光强度与假病毒感染剂量呈正相关,证明其具有感染活性。结论成功构建了EV-D68假病毒。
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