作者：乔玉玲; 卢卫嘉; 陈继军; 秦海艳; 王建锋...噬菌体抗体库筛选中和活性亲和力
摘要：目的以人肿瘤坏死因子（human tumour necrosis factor-α，humanTNF．d）为靶抗原，从构建好的人源天然单链抗体（single-chain antibody fragment，ScFv）噬菌体抗体库中筛选对应的SeFv抗体，验证其中和活性后测定动力学常数（kinetic dissociation，KD）。方法以TNF-α梯度稀释后包被免疫管，对人源天然ScFv噬菌体抗体库进行3轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选，制备TNF-α单克隆噬菌体抗体颗粒，经ELISA试验筛选阳性克隆后测序并分析：将正确的阳性抗体序列亚克隆到pET-26b表达载体上，原核表达后用Ni Sepharose 6 Fast Flow介质进行纯化：用MTT比色法对筛选的ScFv进行中和活性验证，并测定其中和抗体的KD。结果通过3轮筛选共得到18个正确的抗体氨基酸序列，对其原核表达及纯化后得到的6株可溶性表达的抗TNF-α ScFv进行中和活性验证，并对其中有中和活性的4株ScFv抗体测定KD。结论从人源天然ScFv噬菌体抗体库中成功地筛选出4株抗人TNF-α的ScFv中和抗体，其中1株ScFv抗体的KD为4．80×10^-8，细胞毒中和率达到48．9％，达到了药用级抗人TNF-α中和抗体的研发要求．为全分子抗体药物的构建及稳定细胞株的筛选奠定了一定的基础。
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