作者：张培星; 李涓; 窦倩倩; 贾晓晖甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2表皮生长因子功能区多克隆抗体琼脂双扩散法免疫印迹
摘要：目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2（MBL-associated serine protease-2．MASP．2）EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定，为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的pGEX-6P-2原核载体诱导表达GST．EGF融合蛋白，并采用商品化GST-Beads进行纯化；将纯化的融合蛋白作为抗原，与弗氏完全佐剂充分混合后，免疫5周龄BALB／c雌性健康小鼠，制备多克隆抗体；利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价，并进一步应用Westernblot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白，以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体，与其他蛋白无交叉反应；琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1：8：West-elTlblot检测的EGF抗体效价大于1：2000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。
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