作者：王倩; 周志军; 李娟; 彭焱; 岳胜兰; 李陶...血管性血友病因子酶联免疫吸附测定验证活性
摘要：目的建立检测人血管性血友病因子（yon Willebrand factor，vwF）胶原结合活性（collagen-binding assay，CBA）的酶联免疫吸附测定法，验证后用于vwF纯化工艺的探索。方法用微量滴定板做载体，以人Ⅲ型胶原包被酶标板．HRP标记的人抗vWF为检测抗体，通过筛选不同的包被条件、胶原质量浓度及检测抗体含量确定其反应参数，建立人vwF胶原结合活性检测方法，同时验证该方法的准确度、精密度、特异性、选择性及样品稳定性，并初步应用于vWF纯化工艺的探索。结果使用pH9．5碳酸盐缓冲液包被胶原，包被质量浓度为20μg／mL，检测抗体稀释度为1：4000，国际标准品的线性范围为51．500～3．218mIU／mL，R^2≥0．999。定量上限为51．500mlU／mL，回收率在81．60％～105．08％；定量下限为3．218IU／mL，回收率在90．50％～108．18％，cy均≤5．0％；高、中、低浓度质控样品的回收率在80．3％～109．6％范围内：批内CV值≤8．0％，批间cy值≤6．4％。当NaCl浓度在55～350mmol／L、CaCl2浓度≤125mmol／L时，定量上限的活性回收率在80％～120％范围内；当vWF／FⅧ〉0．1时，质控样品准确度在100％±25％范围内：vWF标准品在室温放置2h的回收率在88．06％～87．21％，于-80℃反复冻融的回收率在80．55％．103．1l％范围内，于-20℃反复冻融的回收率在55．28％～79．55％范围内。结论建立了人vWF胶原结合实验，该方法具有良好的准确度、精密度、选择性和特异性，可用于vWF纯化工艺样品中vwF的胶原结合活性检测。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
