作者：马金; 李军强; 莘春林; 段静留; 朱涛脊髓灰质炎病毒草地贪夜蛾细胞3cd蛋白酶p1前体蛋白重组杆状病毒类病毒颗粒
摘要：目的获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据。方法将I型脊髓灰质炎病毒（Mahoney株）的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flash BAC ULTRATM系统制备重组杆状病毒;将Mahoney株的P1基因与Sabin株Ⅲ型的3CD基因组合,用同样方法构建重组杆状病毒。通过接种昆虫细胞草地贪夜蛾细胞（sf-9细胞）对两种病毒进行扩增,再接种昆虫细胞粉纹夜蛾细胞（High five细胞）扩大培养,并通过定量PCR对P1和3CD基因的表达进行验证,利用Western blot检测P1蛋白的表达及被3CD蛋白酶剪切的情况。结果获得了两株稳定表达脊髓灰质炎病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒。其中,重组杆状病毒（Bac U-Mahoney-P1-3CD）在感染细胞后,3CD蛋白酶表达量较低,不能有效剪切P1前体蛋白;而重组杆状病毒（Bac U-Mahoney-P1-Sabin PV3 3CD）感染细胞后,3CD蛋白酶的表达量和对P1前体蛋白的剪切效力都有明显提高（P〈0.05）。结论将Mahoney株P1基因和Sabin株Ⅲ型的3CD基因的组合构建重组杆状病毒,可有效地在昆虫细胞中表达P1和3CD基因,并且Sabin株Ⅲ型的3CD蛋白酶可有效地剪切Mahoney株的P1前体蛋白。
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