作者：蓝海云 姚昕 梁争论 周诚乙型肝炎病毒变异体毕赤酵母表达
摘要：目的：表达野生及变异的乙型肝炎病毒（ HBV）表面抗原，为评价其免疫诊断试剂的敏感性提供依据。方法利用含有野生型和3种突变型乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg）序列为模板PCR进行扩增，将目的片段胶回收后，进行酶切与酵母表达载体pPICZA和pPICZα连接。电转化酵母菌株GS115，通过使用抗生素Zeocine加压筛选，获得高拷贝菌株。挑选多个单克隆菌株在BMMY中诱导表达，选择表达量高的菌株用于后续研究。结果构建野生型HBsAg以及突变型T126N、D144A、G145R三种重组质粒。通过对157株菌株筛选，获得1株野生型和3株突变型表达量高的菌株。表达产物经雅培Architect i2000的检测试剂、确证试剂以及WB（ Western blotting）检测，结果均为阳性。结论成功表达了野生及变异的HBsAg，为评价国产HBsAg诊断试剂对变异株的检测能力提供了依据。
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