作者：曾艳 陈强 王敏 孙建光 高俊莲重金属污染土壤抗汞细菌分离鉴定16srrna基因序列分析mera基因克隆与表达
摘要：【目的】本研究旨在从重金属汞抗性细菌中分离鉴定汞抗性基因【方法】从北京凉水河河床底泥中分离抗汞细菌,采用16SrRNA基因序列分析结合生理生化特征对菌株进行鉴定。根据GenBank中已发表的多种抗汞细菌的merA基因序列设计引物,以抗性细菌基因组DNA为模板,扩增merA基因,并在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）表达。同时对表达菌株的重金属汞抗性进行测定。【结果】分离得到一株能在含HgCl2为70mg/L的平板上生长良好的高抗汞细菌,编号为KHg2。16S rRNA基因序列分析结果表明,菌株KHg2与Bacillus silvestris的模式菌株DSM12223T有96%的同源性,其形态特征及生理生化特性与文献报道的Bacillus silvestris一致。从菌株KHg2中扩增得到1687bp DN断,其序列与Pseudomonas putida的merA基因序列同源性达到99%,将该DN断克隆于pET-30a（＋）得到重组质粒pZY2,转化宿主菌获得表达菌株E.coliBL21（DE3）.pZY2,经IPTG诱导后产生相对分子量约为33KD的蛋白。重金属汞抗性测定结果表明,表达菌株E.coliBL21（DE3）.pZY2可以在含HgCl2为20mg/L的培养基中生长,而转入空载体pET-30a（＋）的阴性对照菌株E.coliBL21（DE3）pET-30a（＋）则不能在含HgCl2为20mg/L的培养基中生长。【结论】分离的抗汞菌株KHg2与Bacillus silvestris关系密切;从菌株KHg2中克隆到汞抗性基因merA,并在大肠杆菌中得到了成功表达;表达merA基因的大肠杆菌具有抗重金属汞的特性。
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