作者：李开; 赵智; 张英姿; 王宇; 丁久元谷氨酸棒杆菌大肠杆菌穿梭载体启动子探测载体
摘要：从质粒pXZ10145和pUC19出发，构建了一个谷氨酸棒杆菌／大肠杆菌穿梭载体pAK6。pAK6的大小为5684bp，带有卡那霉素和氨苄青霉素抗性选择标记，以及多克隆位点。在pAK6基础上，构建了以氯霉素乙酰转移酶为报告基因的启动子探测载体pAKC6，pAKC6的大小为6474bp。采用鸟枪法，将经Sau3AI消化的谷氨酸棒杆菌基因组片段连入pAKC6；根据谷氨酸棒杆菌对氯霉素的抗性，从中分离出两个具有启动子功能的插入片段。通过测定报告基因氯霉素乙酰转移酶的活性，对两个启动子片段在谷氨酸棒杆菌中的强度进行了初步的判断；测序后，用启动子预测软件对其结构进行了预测，证实了启动子序列的存在。
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