作者：徐剑宏; 武俊; 洪青; 张志琳; 李顺鹏sphingomonas呋喃丹降解双标记基因工程菌
摘要：用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonas sp．CDS-1的基因组DNA，将所得DN段与Barn H Ⅰ酶切的启动子探针载体pRobe—GFP酶连后转化E．coli DH5α感受态细胞，在选择性平板上培养，从大约1×10^4个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7，将它的重组质粒pF7用Eco R Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后得到包含Sphingomonas sp．CDS-1启动子和加基因的DN段，将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上，得到pPZP201-gfp质粒。将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至Sphingomonas sp．CDS-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp，经荧光显微镜观察，疥基因在CDS-gfp中表达量很高。对标记菌株进行连续传代10次（48h／次），发现pPZP201-gfp依然存在，而且发光明显。通过Not Ⅰ酶切位点把linA基因连接到pUT／mini—Tn5上构建新的转座子载体pUT／mini—Tn5-linA。以pRK600为辅助质粒将pUT／mini—Tn5-linA引入到CDS-1中，linA基因通过转座作用，插入到CDS-gfp的染色体中，得到双标记菌株CDS—GFP—LinA。该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌，本研究的结果为研究Sohineomonas sp．CDS-1的生态学行为奠定了基础。
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