作者：郑其升; 张晓勇; 刘华雷; 李鹏; 陈溥言h5n1亚型禽流感病毒血凝素基因原核表达
摘要：根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因序列设计引物,用PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA1基因,将该片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-HA1.阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导,HA1基因获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在.通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定了表达HA1基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.8mmol/L,诱导时间为3h.Western blot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性.以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测H5亚型AIV抗体的iHA-ELISA方法.结果表明,抗原的最佳包被浓度为4μg/mL,血清的最佳稀释度为1:200,阳性标准初步定为:OD待检血清＞0.5,且OD待检血清/OD阴性血清＞2.
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