作者：丁家波; 崔治中; 孙淑红; 姜世金马立克氏病病毒pp38基因双向启动子重组质粒鸡胚成纤维细胞mdv
摘要：马立克氏病病毒(MDV)pp38基因上游是病毒基因组DNA复制原点.在其两侧均含有启动子TATA-box、CAAT-box等特征性的保守基元,推测是一个天然的双向启动子.为了在体外验证其双向启动活性,本研究以MDVpp38为报告基因,并将其ORF插入到pUC18中,构建了pUC-pp38质粒.将包含该启动子完整区域的789bp序列分别以正反两个方向克隆进pUC-pp38质粒中pp38报告基因的上游,获得的重组质粒pProfpp38和pProrpp38.将所获得的重组质粒分别转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过间接免疫荧光试验检测pp38基因的表达以验证该启动子的双向启动活性.结果表明,马立克氏病病毒复制原点区的启动子无论以何种方向插入pUC-pp38质粒中,在转染细胞24h内能检测到pp38基因的表达,48h后能获得高效和持续的表达.逐渐缩小该启动子的范围,最终在320bp时,仍能检测到两个方向较强的启动活性.
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