作者：超博; 张红; 李文月; 邵思奇; 张志民变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因ropa克隆蛋白表达
摘要：克隆并表达变形链球菌耐氟菌株耐酸相关基因ropA。以变形链球菌UAl59的耐氟菌株全基因组为模版，PCR扩增ropA基因并与pMD-18T克隆载体连接构建重组克隆质粒，测序鉴定。BamHI、觑ndⅢ双酶切重组克隆质粒，回收目的基因片段并与pProEXHTa表达栽体通过粘性末端连接构建重组表达质粒，转化入大肠埃希菌感受态细胞DH5α，IPTG诱导，SDS-PAGE检测RopA表达量。测序结果为变形链球菌UAl59的耐氟菌株ropA基因碱基序列与亲代菌株UAl59完全一致。SDS-PAGE结果显示IPTG成功诱导RopA蛋白表达，并且随诱导时间的延长蛋白表达增多。变形链球菌UAl59耐氟菌株的耐酸相关基因ropA未发生突变，说明变形链球菌耐氟菌株耐酸性增强不是由ropA碱基序列的改变导致。本研究成功诱导RopA蛋白表达，为后续研究RopA蛋白功能奠定了基础。
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