作者：王鸿雁; 王博; 齐莹; 马艳萍; 黄郁晶; 柳...人巨细胞病毒
摘要：优化构建人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）miR-UL22A的真核表达载体；明确HCMV临床株及实验室株感染过程中miR-UL22A-5p及miR-UL22A-3p的表达情况。扩增HCMVUL22A编码区不同长度（975、494、209及140bp）的序列，构建表达miR-UL22A的重组pSilencer（pS）载体，转染人胚肾293细胞后提取总RNA；收集HCMVI临床株Han株以及实验室株Towne株感染人胚肺成纤维细胞后6、12、24、48和72h以及不同感染时相（即刻早期、早期、晚期）的总RNA标本；应用TaqMan颈环一实时荧光定量PCR技术检测上述标本miR-UL22A-5p及miR-UL22A-3p的表达量。成功构建了包含上述不同长度miR．UL22A编码序列的重组载体；侧翼序列长度各为40bp左右的pre-miRNA（即插入140bp的编码序列）表达成熟miRNA的效果最佳；在病毒的一个复制周期内，HCMV临床株和实验室株miR—UL22A的表达趋势无明显差异，均在感染后6h即检测到表达，72h达到峰值，且在即刻早期即有miRNA的明确表达；无论是在重组载体表达状态下还是自然感染状态下，miR-UL22A-5p始终为miR-UL22A前体优势表达的miRNA。结果表明，有140bp片段miR-UL22A编码序列的重组载体能够高效地异源表达miR-UL22A-5p及miR-UL22A-3p；miR-UL22A-5p始终为miR-UL22A前体优势表达的miRNA。为进一步研究miRNA转录后调控作用提供了参考。
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