人pEGFP-C1-IL-8真核表达载体的构建与表达

作者：黄素辉; 马晓霞; 屈野; 郭小芹; 王越白介素8绿色荧光蛋白真核表达载体卵巢癌细胞系

摘要：【目的】构建人pEGFP-C1-IL-8真核表达载体,为研究白介素8（interleukin-8,IL-8）在卵巢癌及其他肿瘤中的作用奠定基础。【方法】PCR法扩增IL-8全基因序列后,将其克隆入含增强型绿色荧光蛋白（enhenced green fluorescent protein,EGFP）表达载体pEGFP-C1,通过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,将构建好的表达载体与其空载体分别转染至人卵巢癌细胞系A2780中,荧光显微镜下观察转染效率,用RT-PCR和ELISA法检测细胞转染后细胞IL-8的表达水平。【结果】经过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定,重组人IL-8真核表达载体构建正确。pEGFP-C1-IL-8和pEGFP-C1分别转染入A2780细胞后,转染成功的细胞能够表达GFP,转染效率约为75%~80%。转染空载体的A2780细胞未检测到IL-8 m RNA表达,而转染重建载体的A2780细胞表达水平较高,细胞上清液IL-8蛋白表达水平约为前者的2.91倍（P〈0.05）。【结论】成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-IL-8,重组质粒能使人卵巢癌细胞系A2780过表达IL-8。

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