重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的制备与分析

作者：王俊虹 杨帆 魏茂提 徐忠伟蓖麻毒素相思子毒素b链嵌合体抗原性

摘要：【目的】观察蓖麻毒素（ricin toxin,RT）、相思子毒素（abrin toxin,AT）B链的嵌合体蛋白原核表达并分析其抗原性和毒性。【方法】利用柔性linker-（G4S）3连接两个毒素B链基因（RTB和ATB）,优化嵌合体基因RTB-ATB后构建表达质粒pQE80LRTB/ATB,转化至E.coli M15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western印迹检测RTB-ATB的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行嵌合体蛋白的细胞毒性实验。【结果】RTB-ATB全长1647bp,编码549个氨基酸残基;E.coli M15在诱导条件为30℃、1 mmol/L IPTG,3 h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子量约为60×10^3Da,经Ni柱纯化后纯度达98.9%;Western blotting印迹结果表明嵌合体蛋白保持RTB和ATB原有各自的抗原性;MTS实验结果表明目的蛋白无毒性。【结论】嵌合体蛋白RTB-ATB实现高表达,具有良好的抗原性,为研制针对RT和AT的双价疫苗奠定基础。

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