有机磷水解酶的大肠杆菌细胞表面展示与酶活特性

作者：张红星 李茜茜 叶婷 郑世学 李林有机磷水解酶表面展示生物降解全细胞酶活性

摘要：利用丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）KCTC1832菌株的冰核蛋白（InaK）的N-末端作为锚定单元和来自黄杆菌（Flavobacterium sp.）ATCC27551菌株opd基因编码的有机磷水解酶作为功能蛋白,构建了一株具有全细胞催化效应的大肠杆菌（Escherichia coli）表面展示工程菌MMBL-405.对该工程菌全细胞有机磷水解酶活性的正交试验结果表明,在诱导物IPTG浓度为0.1 mmol/L、诱导温度为20℃、诱导时间为8 h和Co2＋添加浓度为100μmol/L的优化培养条件下,其全细胞酶活性可达到0.62 U/mg细胞干重,是目前国外同类工作所报道酶活性的13.7倍以上.对工程菌所携带的外源质粒在无抗性条件下的稳定性进行了测定,结果表明工程菌经连续转接7次和继代培养168 h后,质粒携载率仍达到60%.

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