作者：刘瑶 林菊生 熊杰 谭锦泉 张强 常莹 任精...遗传印记基因peg10白蛋白启动子转基因载体鉴定
摘要：目的构建小鼠肝脏特异性表达人遗传印记基因PEG10的转基因载体pALB—PEG10-EGFP，为制备转基因小鼠做准备。方法RT—PCR扩增PEG10基因cDNA序列，克隆入T载体进行酶切、测序鉴定，后将其定向克隆至真核表达载体pALB．EGFP中ALB的下游，构建转基因载体pALB—PEG10-EGFP；在Lipofectamine介导下转染L02细胞，经G418抗性筛选，挑选阳性克隆并扩大培养；采用RT—PCR、Westernb1ot、免疫细胞化学等方法分析PEG10在L02细胞中的表达和细胞内定位。结果酶切和测序结果表明pALB—PEG10-EGFP构建成功；稳定转染后的L02表达有PEG10的mRNA及蛋白，且主要定位于胞浆。结论重组体pALB—PEG10-EGFP的构建初步奠定了转基因小鼠制备的基础。
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