重组缓释白介素4的克隆表达与鉴定

作者：张冲; 黄子珂; 李思光缓释胶原蛋白结合域白介素4

摘要：目的 重组表达可以缓释的抗炎因子白介素4（Interleukin 4,IL-4）。方法 根据小鼠IL-4的氨基酸序列,并基于大肠杆菌密码子偏爱性合成IL-4的基因,通过聚合酶链式反应（PCR）方法将胶原蛋白结合域（collagen binding domain,CBD）的编码序列和组氨酸标签序列连接到IL-4基因上,运用无缝克隆技术将上述重组基因插入p ET-30a（＋）载体。重组蛋白通过组氨酸标签进行纯化,纯化的蛋白被用于诱导M 0巨噬细胞分化成M 2巨噬细胞,同时检测M2巨噬细胞相关基因表达以及对白介素10（Interleukin 10,IL10）的分泌。与Ⅰ型胶原蛋白的联用验证胶原蛋白对重组因子的吸附和缓释功能。结果 带有CBD序列和组氨酸纯化标签的IL-4通过镍柱纯化,具有与商业化IL-4相似的生物活性。功能实验证实其能够被胶原蛋白吸附,并能脱离胶原蛋白缓释。结论 通过大肠杆菌表达纯化获得了能够缓释的抗炎因子IL-4.

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