作者：杨向祎 郭颖 曹小芳 贾艳飞 王晓尉 许剑...精液冷冻印记基因亚硫酸氢盐克隆测序法dna甲基化
摘要：目的检测常规精液冷冻技术中冷冻保护剂、冷冻过程及冷冻时间长短对精子父源印记基因H19及母源印记基因MEST印记控制区域（imprinting control region,ICR）的DNA甲基化的影响程度。方法以10例符合精子库捐精条件的正式志愿者为研究对象,将每份精液样品平均分为4组：A组为新鲜精液,作为对照;B组加入同体积冷冻保护剂,不冷冻;C组加同体积冷冻保护剂,冷冻2d;D组加同等体积冷冻保护剂,冷冻两个月。通过亚硫酸氢盐克隆测序法分析H19及MEST ICR的DNA甲基化状态。结果四组（A、B、C、D组）H19基因ICR区的DNA甲基化率以克隆数计算时分别为58.70%、53.85%、49.46%和45.74%,以CpG岛数计算时分别为97.57%、97.33%、97.13%和96.56%,两者都有降低趋势,但组间差异均无统计学意义（P〉0.05）;四组MEST基因ICR区甲基化率以克隆数计算时分别为41.10%、45.33%、47.30%和50.68%,以CpG岛数计算甲基化率时分别为1.77%、1.74%、2.00%和2.26%,有升高趋势,但差异亦无统计学意义（P〉0.05）。结论常规精液冷冻复苏技术对精子父源印记基因H19及母源印记基因MEST的ICR区甲基化程度未见明显影响。
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