作者：成毅明 刘美玲 石心泉 王介东 贾孟春lm23合成肽精子发生多克隆抗体
摘要：目的制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体，对其特性进行初步鉴定，并对LM23多克隆抗体进行初步应用。方法利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列。应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274-291个氨基酸多肽（接近C端），经C18的RP—HPLC纯化后，通过高碘酸钠法，将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联，免疫新西兰大耳白兔，获得LM23蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价。通过Westernblot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达；通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位。结果化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20，第274-291个氨基酸多肽，纯化后两条多肽纯度都达到90％以上，符合免疫用抗原标准。将多肽与KLH交联，用于免疫动物。经ELISA鉴定，两种多克隆抗体的效价分别达到1：64000和1：128000。应用大鼠睾丸组织切片进行LM23—18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究，发现精母细胞有阳性颗粒反应，且LM23主要表达于细胞核。Westernblot研究证实，LM23—18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子萤（Mr）约为36kD的LM23蛋白。结论所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Westernblot及免疫组化研究。LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持。
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