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不同冷冻方法对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响

作者:陈雅; 葛红山; 叶碧绿玻璃化冷冻慢速冷冻细胞骨架胚胎发育

摘要:目的比较不同冷冻方法对不同成熟阶段小鼠卵母细胞复苏、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求最佳的卵母细胞冷冻方法。方法分别以SOPS玻璃化及慢速法冷冻小鼠中期(MID和生发泡期(GV)卵母细胞。解冻复苏后,分别作体外培养成熟(IVM)、体外受精(IVF)或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率及纺锤体等细胞骨架指标。结果玻璃化冷冻组MⅡ卵和GV卵母细胞的复苏率及囊胚率均显著高于慢速冷冻组(P〈0.05)。慢速冷冻组中MⅡ卵复苏率显著低于GV卵(40.4%vs57.1%,P〈0.01)。但同一种冷冻方法保存的MⅡ卵和GV卵的受精率及囊胚率相比,均无显著性差异(P〉0.05)。两组的GV卵成熟率无显著差异。玻璃化冷冻组GV卵的纺锤体、染色体及纺锤体和染色体正常率均高于慢速冷冻组GV卵但无显著差异。结论玻璃化冷冻能有效改善冻融卵母细胞的复苏及胚胎发育;与MⅡ卵比较,冷冻GV卵对细胞骨架损伤较小;两种冷冻方法均不影响GV卵冻融后成熟。

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