作者:顾玲; 欧阳柳凤; 陈飞燕; 江玉翠; 陈翠花...人参总皂苷人参总皂苷多抗酶联免疫吸附测定试验生物膜层干涉技术免疫细胞化学
摘要:目的 进行人参总皂苷(ginseng total saponins,GTS)多克隆抗体的制备,并用不同方法进行验证。方法 首先在D101大孔吸附树脂纯化的基础上,采用阴阳离子交换树脂的方法进行人参皂苷高纯提取物的制备,香草醛-硫酸比色法估测人参总皂苷的含量;然后通过过碘酸钠法构建人参总皂苷和牛血清白蛋白(BSA)的偶联物作为抗原制备得到人参总皂苷多抗;使用Protein A/G琼脂糖纯化和抗原柱双纯化抗体;最后用免疫细胞化学和生物膜层干涉(biological membrane layer interference,BLI)技术验证抗体。结果 得到高纯度的人参总皂苷;SDS-PAGE表明抗原GTS-BSA偶联物制备成功;ELISA法检测受试组效价为(29.52±4.31),亲和树脂纯化后得到较纯多抗;生物膜层干涉技术表明人参总皂苷多抗与人参总皂苷、人参皂苷Re、Rg1、Rh1、Rh2、原人参二醇、F1、化合物K、原人参三醇的亲和力分别为3.99×10-7、4.69×10-9、2.59×10-9、2.40×10-6、1.62×10-4、2.64×10-7、1.66×10-10、1.08×10-7和1.32×10-6;免疫细胞化学(ICC)从细胞学水平上验证了抗体的有效性。结论 人参总皂苷多抗的效价和特异性较高,可为下一步研究人参总皂苷在脑中的分布做好铺垫。
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