作者：余汇; 蒋向军; 覃宇燕; 王骏; 韩艺璇; 吴...罗汉果内参基因实时荧光定量pcr
摘要：目的克隆罗汉果甘油酸-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH，Ec1．2．1．12）基因，分析其在基因表达定量研究中其作为内部参照基因的可行性。方法采用同源克隆和cDNA末端快速克隆技术，以罗汉果cDNA为模板扩增GAPDH基因的保守区片段。结果获得了罗汉果GAPDH保守区序列cDNA，命名为SgGAPDH（GenBank注册号：KC410810），序列长度为627bp，编码209个氨基酸的多肽。系统发育分析表明，SgGAPDH属于植物甘油酸-3-磷酸脱氢酶家族。半定量PCR分析表明罗汉果GAPDH基因在不同组织中表达很稳定。以其作为内部参照基因，采用实时荧光定量PCR（Real—timePCR）研究了异戊烯基焦磷酸异构酶（Isopentenyl—diphosphatedehaisomerase）的组织表达规律。结果显示SgGAPDH具有良好的扩增效果和重现性。结论首次克隆了罗汉果GAPDH基因，明确了该序列在基因表达分析中的内参照作用，为罗汉果甜苷生物合成基因的研究提供了条件。
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