作者：张莉莎; 吕秉乐; 左丽e蛋白原核表达
摘要：目的体外扩增登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列,构建pET28a（＋）-ME、pET28a（＋）-NE,分析其在E-coli BL21中的表达。方法 PCR方法扩增（DENV-2）M株、NGC株E基因部分序列并构建原核重组载体pET28a（＋）-ME、pET28a（＋）-NE,将重组载体转化E-coli BL21,IPTG诱导表达,采用镍离子亲和层析的方法纯化目的蛋白并用SDS-PAGE电泳和Western-Blot进行鉴定。结果经双酶切、PCR和测序证实成功构建原核重组载体pET28a＋-ME、pET28a（＋）-NE,Western-Blot证实成功诱导出目的蛋白,SDS-PAGE电泳证实亲和层析法纯化后得到较高纯度的目的蛋白。结论检测到目的蛋白的表达,经纯化后得到纯度约为90%的目的蛋白,为研究登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E蛋白在致病机制方面奠定了一定的基础。
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