作者：唐渝; 姚静; 冯小云; 田鲲釉原蛋白基因提取基因克隆
摘要：目的提取人釉原蛋白全长基因并进行克隆。方法从处于釉质发育阶段的青少年下颌第三磨牙的牙胚中取得细胞总RNA,通过反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction)得到釉原蛋白全长基因,与pMD19-T载体构建质粒后转入大肠杆菌E.coliTop10中扩增克隆。结果经过超微量分光光度计检测,A260/A280为1.99,A260/A230为2.08,表明提取的总RNA质量较高。对釉原蛋白基因与pMD19-T载体构建的质粒进行测序后比对分析,结果与美国国家生物技术信息中心公布的序列一致,表明获得了釉原蛋白全长基因。扩增釉原蛋白全长基因并进行1%琼脂糖凝胶电泳,可见大小约为570 bp的特异性条带,与预期一致。结论可以从处于釉质发育阶段的人第三磨牙牙胚中提取人釉原蛋白全长基因,并能通过与pMD19-T载体质粒构建转入E.coliTop10中成功克隆。
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