作者：杨洁 贺松乳酸乳球菌德式乳杆菌保加利亚亚种nisin抗性基因食品级筛选标记
摘要：目的：评估乳酸乳球菌Nisin抗性基因在德氏乳杆菌保加利亚亚种的表达活性，为建立食品级筛选标记做准备。方法将新鲜牛奶接种于含有400μg/ml乳酸链球菌素的M17平板上，在分离的菌株中筛选乳酸乳球菌，同时提取其基因组DNA和质粒DNA，根据已公布的Nisin抗性基因序列设计一对引物，以提取的基因组DNA和质粒DNA为模板进行PCR扩增，产物进行电泳分析。将目的基因插入到大肠杆菌乳杆菌穿梭质粒-pMG36e中，并在德式乳杆菌保加利亚亚种中观察目的基因的表达活性及其作为筛选标记的活性。结果成功筛选出对Nisin具有抗性的乳酸乳球菌，进行目的基因扩增后成功将目的基因转化到L6032中，并表达出Nisin抗性。结论在德式乳杆菌保加利亚亚种中成功克隆及表达出Nisin抗性基因。
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