作者：彭司琪; 郭雅兰; 李燕; 黎文珂; 郭硕; 周...游离胎儿dnarhd基因型无创性产前诊断实时荧光定量pcr
摘要：目的 运用荧光定量PCR（quantitative realtime PCR,Q-PCR）技术检测Rh D阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿Rh D基因型。方法 通过微量DNA抽提技术,并利用琼脂糖凝胶电泳法富集孕妇血浆游离胎儿DNA（Cell-free fetal DNA,cff DNA）,用Q-PCR技术检测43例Rh D阴性孕妇血浆cff DNA,测定不同孕期的孕妇全血和血浆中管家基因（β-actin）的含量,比较不同孕期孕妇全血和血浆DNA含量的变化;并用男性性别决定基因（sex-determining region Y gene,SYR）确定胎儿DNA的存在,以未有妊娠史的健康女性和健康男性作为阴性和阳性基因对照;同时对孕男胎的Rh D阴性孕妇血浆cff DNA进行Rh D基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,与孕妇产后采集的新生儿脐血Rh D定型结果对比分析。结果 （1）孕妇早、中期孕组血浆DNA含量差异无统计学意义（P〉0.05）,早、晚期和中、晚期孕组血浆DNA差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）43例Rh D阴性孕妇中26例经产后证实为男胎,母血浆中检测到SYR基因特异性扩增的25例,灵敏度为96.15%,特异度为94.44%,准确率为97.67%。（3）26例孕男胎孕妇血浆中胎儿DNA的Rh D基因型检测发现,有19例胎儿Rh D血型阳性,5例胎儿Rh D血型阴性,即24例胎儿DNA的Rh D基因型与表型相符,准确率为97.6%。结论 运用Q-PCR技术检测Rh D阴性孕妇血浆中cff DNA进行无创性产前诊断胎儿Rh D基因型,是一种敏感性高、特异性好的无创性产前诊断方法,可用于临床诊断和预防新生儿Rh D溶血病。
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