作者：刘志杰; 张艳; 余敏君; 方明礼; 黎村艳幽门螺杆菌lpp20真核表达重组载体
摘要：目的以幽门螺杆菌外膜脂蛋白Lpp20为目的基因，构建H．pylori Lpp20基因的真核表达重组载体pcD-NA3．1（＋）-Lpp20，为H．pylori核酸疫苗的研制奠定实验基础。方法用Primer5．0软件分析GenBank中H．pylori外膜脂蛋白Lpp20基因序列，设计合成相应特异性引物，引入BamHI和XhoI酶切位点，以H．pylori 26695株基因组为模板，PCR扩增Lpp20目的基因片段，定向插入真核表达载体pcDNA3．1（＋）多克隆酶切位点中，构建重组体pcDNA3．1（＋）-Lpp20；通过酶切分析，PCR鉴定及测序鉴定，筛选阳性重组体。结果以H．pylori 26695株基因组DNA为模板扩增出特异的Lpp20基因片段，大小约为528bp；双酶切及测序鉴定证明成功构建了H．pylori真核表达重组载体pcD—NA3．1（＋）-Lpp20。结论PCR扩增得到了大小约为528bp的H．pylori Lpp20目的基因片段；并成功构建了pcD—NA3．1（＋）-Lpp20真核表达重组载体。
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