作者：王朝东; 吴晓牧; 胡国柱; 张昆南; 徐红薇...细胞缺氧表达调节
摘要：目的。探讨Aβ-结合性酒精脱氧酶蛋白（ABAD）的基因表达调控机制及其对缺氧反应的分子生物学机理。方法。根据Genebank中包含ABAD基因全长序列的DNA序列设计引物，PCR扩增ABAD基因上游启动子区全长2055bp之片段。并将其亚克隆至荧光酶报告载体Luciferase pGL3中的NheI／SmaI位点，构建ABAD启动子-pGL3表达质粒（P-2055）及5’-端截短的ABAD启动子-pGL3表达载体（P-1453，P-128）。用脂质体Lipofectmine 2000将ipg待转染的空pGL3表达载体DNA（阴性对照）及ABAD全长和5’截短启动子-pGL3表达质粒DNA（P-2055，p-1453，P-128）转染至对数生长的COS-1细胞中。细胞转染后48h，收集细胞，裂解，提取蛋白。以Duabludferase reporter系统为底物并采用荧光测定仪测定荧光酶活性．采用相对活性方法比较全长和截短的ABAD启动子活性，以确定核心启动子序列。采用缺氯箱分别诱导细胞缺氧后。测定ABAD核心启动子序列的活性改变。结果；ABAD全长启动子-pGL3表达质粒（P-2055）的荧光酶活性较pGL3空表达载体高300倍以上（P〈0．001）。该全长启动子截短至-128bp（P-128）时，活性仍为全长序列的105OA，而将该128bp序列去除后，其活性几乎全部消失。ABAD核心启动子序列（P-128）经缺氧处理1、4、8、16h后，其活性分别降为正常氧状态的（64．5±1．7）％、（51．4±1．6）%、（17．8±1．1）％、（8．3±0．3）％，各缺氧时间点相对活性与正常氧状态相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：ABAD上游128bp为该基因的核心启动子序列，决定了ABAD的表达活性．该启动子对缺氧高度敏感，其对缺氧的反应是ABAD缺氧性改变的主要分子机理。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
