作者：牛博文; 陈丽香; 朱孟敏; 彭秀华; 秦波音...精子冷冻
摘要：目的建立一种高效的C57BL/6J背景基因修饰小鼠的精子冷冻及体外受精(IVF)方法。方法以C57BL/6J小鼠为研究对象,围绕冷冻保护液、冷冻精子浓度、复苏后精子处理方法及IVF培养液等方面进行研究,IVF后2-细胞发育率作为冷冻和复苏效率评价标准,对比各组之间发育情况。结果以R18S3(含质量比为18%棉子糖和3%脱脂奶粉)、M-R18S3冷冻保护液[含终浓度为477μmol/L硫代甘油(MTG)的R18S3冷冻液]进行精子冷冻,复苏后在HTF培养液中进行IVF,2-细胞发育率分别为8.4%和20.6%;以R18S3和M-R18S3作为冷冻保护液,以含浓度为1 mmol/L还原性谷胱甘肽(GSH)的HTF培养液进行IVF,2-细胞发育率分别为25.0%和43.5%。高浓度精子冷冻及复苏法可获得64.2%的2-细胞发育率;选取4种C57BL/6J背景基因修饰小鼠进行精子冷冻及IVF,2-细胞发育率34%~90%,胚胎移植后出生率40%~57%。结论 M-R18S3作为冷冻保护液,采用高浓度精子冷冻法进行精子冷冻,冷冻精子复苏后进行受精滴洗涤筛选,以含1 mmol/L GSH的HTF培养液进行冷冻精子IVF,此技术体系可以作为C57BL/6J背景基因修饰鼠的保种及品系恢复手段。
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