作者：杨湘越; 兰小鹏; 徐秀云; 张惠菊舍格伦综合征a抗原分泌表达巴斯德毕赤酵母斑点免疫金渗滤法
摘要：目的在巴斯德毕赤酵母中表达舍格伦综合征A抗原（SSA60）并建立胶体金快速检测方法。方法表达质粒pPIC9k—SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMD1168，在MD平板上筛选重组克隆，用G418快速筛选高拷贝转化子，阳性克隆经甲醇诱导表达后，培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和斑点免疫金渗滤法（DIGFA）鉴定。结果表达产物SSA60的分子量约60000，高拷贝巴斯德毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的，表达量占分泌总蛋白60％以上，产物浓度为600～950mg／L。DIGFA检测85份舍格伦综合征（SS）患者血清和30份正常人血清，抗SSA检测阳性率为95．3％（81／85），特异度为100％（30／30）。与德国欧蒙ENA酶斑点法对比检测的符合率为96．5％（111／115），差异无统计学意义（P〉O．05）。结论SSA60在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达，DIGFA简便、快速、准确，可用于临床自身免疫病的诊断。
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