作者：崔佳 万翠香人纤溶酶原活性区质粒构建
摘要：目的克隆和表达人纤溶酶原（plasminogen,Plg）的丝氨酸蛋白酶（SP）活性区基因μplg,并进行重组蛋白的纯化及功能探索。方法用PCR方法从p DNR-plg质粒上扩增μplg,构建原核表达载体p ET22b（＋）-μplg,IPTG诱导重组蛋白表达后复性,再经Ni＋-NTA树脂亲和层析纯化,通过与双歧杆菌外膜蛋白Serpin的共孵育实验来探索μPlg的功能。结果 PCR成功扩增出了680 bp的人纤溶酶原Plg的SP区基因μplg,测序正确后与表达载体p ET22b（＋）重组,重组质粒p ET22b（＋）-μplg在大肠杆菌BL21中成功表达出分子量约为35 k D的μPlg蛋白质,经纯化后的蛋白纯度高达约90%以上,与Serpin蛋白共孵育后得到了二者的复合物。结论人纤溶酶原μPlg的成功克隆、表达及纯化对于研究SP区功能和与双歧杆菌的黏附作用有重要意义。
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