作者：冯爱娟; 杨太成; 刘耘; 冼江阴茎鳞癌尿道人尿上皮细胞cdna文库hus双链重组率重组子
摘要：为了进一步分离人尿道(阴茎)鳞癌组织特异性表达基因和鳞癌特异性相关基因,采用SMART技术,构建了人尿道(阴茎)鳞癌上皮细胞cDNA文库,从人尿道(阴茎)鳞癌上皮细胞中分离总RNA并纯化mRNA,利用经修饰的oligo(dT)引物合成cDNA第一链,利用SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经酶切和过柱分级分离后,克隆入λTriplEx2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果表明原始人尿道(阴茎)鳞癌上皮cDNA文库获得1.57×107个重组子,重组率达到98%.文库扩增后,滴度达到4.0×109pfu/ml,插入cDNA平均长度为2.5kb. 构建的人尿道(阴茎)鳞癌上皮cDNA文库具有良好的质量,该cDNA文库为进一步筛选鳞癌抑癌基因及鳞癌特异性表达基因奠定了基础.
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