作者：王美娜; 潘娟; 王楠; 孟小林map30抗菌活性
摘要：根据GenBank上MAP30基因的全序列，设计引物PCR扩增得到MAP30基因，并通过重叠PCR方法扩增得到PTD—MAP30基因，构建重组表达载体MAP30一pET28a（＋）和PTD—MAP30—pET28a（＋），转化大肠杆菌BL21（DE3）。基因工程菌株在18℃IPTG条件下诱导．表达产物经SDS-PAGE和Westernblot检测显示有与预期大小相符合的蛋白。并用Ni2＋-柱纯化目的蛋白。抑菌圈实验发现MAP30蛋白对弧菌敏感性较高，MTT法测得最小抑制浓度MIC为300μg／mL，生长抑制曲线显示蛋白对弧菌的抑制作用具有浓度依赖性。ELISA实验说明TAT—MAP30蛋白可以快速穿过克氏原螯虾的肠上皮细胞并进入到血淋巴中,在1h左右检测到的蛋白量最多，而且维持时间可以达到6h。
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